Wojciech Kluźniak Szczecin, dnia 18-01-10

Grupa 2b/ rok IV/ Biotechnologia

Ćwiczenie laboratoryjne nr 4

Konspekt

Temat: Amplifikacja DNA badanych materiałów roślinnych przy zastosowaniu techniki ITS-PCR

Cel ćwiczeń: Wykrywanie polimorfizmu w wewnętrznych sekwencjach rozdzielających geny kodujące rybosomalny RNA.

Istota zastosowanej metody badawczej:

ITS-PCR (intergenic transcribed spacer) - stosowany jest w procesach rybotypowania. Wykorzystywane do różnicowania gatunków oraz hybryd pomiędzy nimi występujących.

Amplifikacje PCR badanych materiałów przeprowadzono w oparciu o niżej zamieszczony protokół - skład mieszaniny reakcyjnej.

Matryca DNA:

1. OT-1-3

2. 153/79xOT1-3

3. 153

4. OT 0-6

5. OT-0-6xOT1-3

6. OT-1-3

	x1 [μl]	x8 [μl]	x6 [μl]
H2O	13,3	106,4	638,4
10x bufor	2,5	20	120
MgCl2	2,0	16	96
dNTPs	2,5	20	120
Primer	2,5	-20-	---
DNA	1,5	---	---
Taq BC	0,7	5,6	33,6
suma			1008

1008 : 6 = 168 μl do każdej z 6 probówek

Dodać do każdej po 20 μl starterów

Podsumowanie/Wnioski

Z otrzymanych danych dzięki metodzie ITS-PCR możemy stwierdzić, że badane osobniki były ze sobą blisko spokrewnione. Dzięki metodzie ITS-PCR określić różnice pomiędzy danymi osobnikamii czy są ze sobą spokrewnione.

---