3.3.4 Wpływ temperatury na aktywność Trypsyny.

Cel: Wykazanie zależności pomiędzy wartością temperatury, a aktywnością badanego enzymu (trypsyny).

1. Wykonanie:

Trypsynę rozcieńczono 10-krotnie w 0,001 M HCl. Do pięciu probówek typu ependorf dodano : 50μl roztworu enzymu, 1ml 0,2 M buforu Tris-HCl pH 8,0,

20μl roztworu substratu BAPNA.

Zawartość probówek wymieszano i inkubowano każdą w innej temperaturze - 0, 25, 37, 47, 57[^oC] przez 30 minut.

Po zakończeniu inkubacji do każdej probówki dodano po 100μl stężonego kwasu octowego, który przerwał reakcję enzymatyczną.

Zmierzono wartość absorbancji prób przy długości fali 405nm.

Otrzymano następujące wyniki:

Tabela 1. Zależność aktywności enzymu od temperatury

Lp.	Temperatura [^oC]	Absorbancja [λ=405nm]	Aktywność właściwa Trypsyny
1	0	0,093	7,75
2	25	0,250	20,83
3	37	0,387	32,25
4	47	0,382	31,83
5	57	0,239	19,92

Aktywność właściwą trypsyny obliczono z zależności:

Jeżeli :

0,012mg - 0,093

1mg - x

X= 0,093/0,012 = 7,75

0,012mg - 0,250

1mg - x

X= 20,83

Analogicznie wykonano pozostałe obliczenia, zależność aktywności właściwej trypsyny od temperatury wykazano na wykresie:

Wykres 1. Zależność Aktywności enzymu od temperatury.

Wnioski:

Temperatura jest ważnym czynnikiem w reakcjach enzymatycznych, na podstawie uzyskanych wyników możemy stwierdzić, że w niskich temperatura tj 0^oC reakcja jest bardzo spowolniona, maksimum aktywności enzym osiąga gdy temperatura inkubacji wynosiła 37-47 ^oC, znaczy to, że w takiej temperaturze reakcja ta będzie najbardziej wydajna.

W temperaturze wyższej niż 50 ^oC większość białek enzymowych ulega denaturacji i reakcja przestaje zachodzić - obserwujemy spadek aktywności właściwej enzymu.

---