Jak przygotować mieszaninę o całkowitej objętości 250 ml o stężeniach składników : ileś tam mM sacharozy, 2 mM EDTA, ileś tam mM jakieś soli mając do dyspozycji wagę , szkło laboratoryjne, wodę destylowaną i w/w substancje w postaci
- soli = postać stała (masa molowa ileś tam)
- 10 % roztwór sacharozy (stężenie w/v)
- 1 M roztwór EGTA
Opis doświadczenia (z wyjściowej ilości 1 ml pobrano 10 mikrol enzymu, .... kuweta o końcowej objętości 2ml, zmierzono A. Zmiana A na minutę wynosiła [ileś tam] Wiedząc, że w iluś tam mikromolach enzymu jest ileś tam mikrogram białka obliczyć aktywność całkowitą i aktywność właściwą. Współczynnik ekstynkcji był podany . Wynik podać w katalach (!)
Ogólnie z tego co pamiętam : mieliśmy 1 ml sacharozy, dodano do niej 9 ml buforu z reagentami. Stężenie sacharozy w rozcieńczonym preparacie byo równe ileś tam.
Rozpoczęto reakcje, próby pobierano co 2 min. W pobranych próbach badano stężenia cukrów redukujących (wyniki podano w formie tabelki : czas + stężenie w tym czasie).
Obliczyć prędkość (początkową?) reakcji. Ile sacharozy pozostało w preparacie enzymatycznym po 12 minutach?
Podać enzymy stosowane w diagnostyce medycznej i laboratoryjnej. Krótko opisać do czego się ich używa (co sie diagnozuje przy ich pomocy)
I Obliczyć aktywność całkowita i właściwą nieoczyszczonego preparatu enzymatycznego (dane podane w zadaniu)
II wiedząc, że wydajność reakcji wyszła 76% a stopień oczyszczenia białka był równy 12 obliczyć wydajność całkowita i właściwą oczyszczonej frakcji.
Zad. 1
W 10 mikrolitrach nieoczyszczonego preparatu enzymatycznego jest 200 i 250 mikrog białka jaka jest aktywność właściwa i całkowita w 30 ml?
Zad.2
Po oczyszczeniu otrzymano 1,5 ml frakcji oczyszczonej 8 razy, wydajność wyniosła 0,5%. Obliczyć aktywność całkowitą i właściwą frakcji.
Zad. 3
S <-> P
K=1/3 - narysować
Zad.4.
1ml frakcji cytosolowej obj. Koncowa = 2ml
5 mikrol frakcji cytosolowej, 0,031 jednostki absorbancji. Zawartość białka w 10 mikrol frakcji = 2mikrog.
Obliczyć aktywność właściwą i całkowitą.
- wzór, z którego można obliczyć energię aktywacji, Ea = -RTln(k:A)
- wzór, z którego można obliczyć Km i Vmax, V = (Vmax*[S]):(Km+S)
- k cat = V max : [Et] - liczba obrotów
- k cat/Km - katalityczna skuteczność enzymu
- V = (kcat/Km) * [Et] * [S]