ANALIZA MIKROBIOLOGICZNA POWIETRZA
Zakres ćwiczenia
Przeprowadzenie badania mikrobiologicznego pomieszczenia zamkniętego .
Cel ćwiczenia
Celem ćwiczenia jest ocena powietrza pomieszczeń zamkniętych pod względem mikrobiologicznym. Oznaczenie ‘’ogólnej” liczby bakterii z uwzględnieniem bakterii pigmentowych i sporowych, liczby gronkowców i paciorkowców, liczby grzybów z uwzględnieniem pleśni i drożdży.
Przebieg ćwiczenia :
Pobieranie próbki powietrza metodą sedymentacyjną.
Metoda sedymentacyjna- polega na opadaniu mikroorganizmów na podłoże stałe w określonym czasie.
Płytki Petriego z odpowiednim podłożem ustawiono w pomieszczeniu zamkniętym (laboratorium). Zdjęto z płytek wieczka i pozostawiono je otwarte na 10 minut.(oznaczanie ogólnej liczby mikroorganizmów ). Po upływie 10 min płytki zakryto i odwrócone wstawiono do termostatu w celu inkubacji.
Te same czynności wykonano do oznaczania bakterii pigmentowych i sporowych, liczby gronkowców oraz promieniowców tylko pozostawiono płytki otwarte na 30 min.
Pobieranie próbki metodą zderzeniową
Metoda zderzeniowa- polega na wychwytywaniu mikroorganizmów w wyniku działania siły uderzeniowej określonej objętości powietrza skierowanego na powierzchnię podłoża i danym czasie.
Do pobrania próbki metodą zderzeniową wykorzystano aparat szczelinowy. Ustawiono go w laboratorium(pomieszczenie zamknięte) . Zdjęto pokrywę aparatu i zdezynfekowano dokładnie za pomocą denaturatu. Na stoliku aparatu umieszczono otwartą płytkę Petriego z odpowiednim podłożem stałym. Po nałożeniu czepca aparatu uruchomiono go zasysając w ciągu 1 min ok. 100l powietrza. Po pobraniu próbek płytki Petriego zakryto i odwrócono wstawiono do termostatu w celu inkubacji.
Typy podłoży , czas pobierania w metodzie sendymetacyjnej , temperatury oraz czas inkubacji podano w tabeli poniżej.
| zanieczyszczenie | podłoże | czas pobierania dla metody sedymentacyjnej |
czas inkubacji dla obu metod | temperatura inkubacji dla obu metod |
|---|---|---|---|---|
| og. l. bakterii mezofilnych | agarowe | 10 minut | 24h | |
| psychrofilnych | agarowe | 10 minut | 48h | |
| pigmentowych | agarowe | 10 minut | 48h | |
| sporowych | agarowe | 10 minut | 24h | |
| gronkowce | Chapmana | 30 minut | 48h | |
| promieniowce | Pochona | 30 minut | 6 dni | |
| pleśnie | Sabouraud’a | 30 minut | 6 dni | |
| drożdże | Sabouraud’a | 30 minut | 6 dni |
Policzono powstałe na płytkach kolonie. Jeśli ilość koloni była mniejsza niż 10 to mnożyło się ją przez 10, zaś jeśli była większa wtedy odczytywaliśmy odpowiednia liczbę z tabeli i mnożyliśmy przez 10. Dla metody sedymentacyjnej ilość mikroorganizmów w 1m3 policzyliśmy wg wzoru:
gdzie:
X – ilość mikroorganizmów w 1m3 powietrza
a – średnia ilość kolonii na powierzchni podłoża
Πr2=3,14*(4,5)2=63,585cm2
t – czas ekspozycji w minutach
Wyniki
| Sala 632 | ||
|---|---|---|
| metoda | sedymentacyjna | zderzeniowa |
| mezofile | 17 | 220 |
| psychrofie | 26 | 258 |
| pigmentowe | 19 | 180 |
| sporowe | 7 | 30 |
| gronkowce | 17 | 160 |
| promieniowce | 0 | 0 |
| pleśnie | 7 | 2 |
| drożdże | 0 | 0 |
Wyniki ostateczne ilości bakterii w 1m3 badanego powietrza:
| Sala 632 | |
|---|---|
| metoda | sedymentacyjna |
| bakterie mezofilne | 13361 jtk/m3 |
| psychrofilne | 2043 jtk/m3 |
| pigmentowe | 1493 jtk/m3 |
| sporowe | 550 jtk/m3 |
| gronkowce | 435 jtk/m3 |
| promieniowce | 0 jtk/m3 |
| pleśnie | 183 jtk/m3 |
| drożdże | 0 jtk/m3 |
Wnioski:
Przede wszystkim wykonane doświadczenie potwierdza skuteczność wykorzystywanych metod badania powietrza. Przy zastosowaniu metody sedymentacyjnej liczba mikroorganizmów była dużo razy mniejsza niż przy zastosowaniu metody zderzeniowej podczas gdy w tym samym miejscu powinny one być zbliżone. Metoda zderzeniowa pozwala więc wykryć znacznie więcej mikroorganizmów.
Wyniki badań pokazują, iż w badanym powietrzu w Sali najwięcej było bakterii mezofilnych oraz psychrofilnych (głównie pigmentowych – odpornych na promieniowanie UV). Bakterie psychrofilne mówią nam o ogólnej liczbie bakterii. Natomiast wśród mezofilnych zawierają się bakterie chorobotwórcze. Również ilość gronkowców mówi nam o zanieczyszczeniu czynnikami chorobotwórczymi. W przypadku badanego powietrza była ona mała w porównaniu z pozostałymi bakteriami (max 7,8x10 w m3). Zanotowaliśmy brak ilość promieniowców oraz drożdży natomiast w metodzie zderzeniowej pleśli było mniej 20 (jtk/m3) niż w metodzie sedymentacyjnej(183 jtk/m3 ). Może to świadczyć o błędzie przy obiczaniu przy metodzie sedymentacyjnej.
Dla bardziej precyzyjnej oceny wyników zastosowaliśmy porównanie z wartościami dopuszczalnego przez Biologicol partiedes ju indor environment Report No 12,1993r.
<50 jtk/m3 -zanieczyszczenie bardzo małe
< 100 jtk/m3 –zanieczyszczenie małe
<500 jtk/m3- średnie/ zwiększone zanieczyszczenie
<2000 jtk/m3- duże zanieczyszczenie
>2000 jtk/m3- bardzo duże zanieczyszczenie
Zaś do zanieczyszenia grzybami:
<25 jtk/ml – bardzo małe
<100 jtk/ml- małe
<500 jtk/ml- średnie/zwiększone
<2000 jtk/ml- duże zanieczyszczenie
>2000 jtk/ml- bardzo duże zanieczyszczenie
Analiza ta potwierdza więc wcześniejsze rozważania.