Wyznaczanie Km i Vmax

1. Obliczyć różnice absorbancji między wzorcami glukozy (10 mg%, 20mg%) a próbką ślepą (0mg%).

2. Narysować wykres zależności absorbancji od stężenia glukozy.

3. Obliczyć różnice absorbancji między próbkami właściwymi i kontrolnymi dla poszczególnych stężeń substratu – sacharozy.

4. Na podstawie prostej wzorcowej dla glukozy oraz różnic absorbancji z pktu 3 odczytać jakiemu stężeniu glukozy odpowiada dana różnica absorbancji wyliczona w pkt 3.

5. Aby było łatwiej narysować wykres, sporządzić sobie tabelkę: w jednej kolumnie stężenia sacharozy (0,25%, 0,5% …. Itd.), a w drugiej dane obliczone w pkt 4 (czyli ilość glukozy w mg% wytworzona w ciągu 15 minut inkubacji), czyli szybkość reakcji.

6. Sporządzić wykres zależności szybkości reakcji od stężenia substratu.

7. Z wykresu wyznaczyć Vmax (w mg% na 1min) i Km (jako stężenie molowe, czyli trzeba sobie przeliczyć procentowe na molowe, do tej zamiany będzie potrzebna gęstość substratu – odszukać w tablicach fizyko – chemicznych).

8. Przeliczyć sobie dane z pkt. 5, tak aby uzyskać 1/S (stężenie substratu) i 1/V i sporządzić wykres Lineweavera – Burka.

9. Na podstawie wykresu Lineweavera – Burka wyznaczyć Vmax i Km (z wzorami na te wielkości odsyłam do podręcznika) i porównać z poprzednio uzyskanymi wartościami (powinny być takie same, a z racji tego, że wykonujecie to Państwo odręcznie, to zbliżone).

10. Z inhibitorem postępujemy w ten sam sposób, proszę innym kolorem nanieść informacje na wykresy.

Każdy wykres proszę zatytułować, opisać osie, zaznaczyć jednostki!