Ćwiczenie 7

(MOiŚ)

T: Identyfikacja bakterii do gatunku na podstawie ich właściwości fizjologicznych i biologicznych.

1) Szeregi biochemiczne – metoda klasyczna
2) Testy API

CIT (citrate), VP (acetoine), GEL (gelatine), ADH (arginine dehydrolase), LDC (lysine decarboxylase), ODC (ornitine
dekarboxylase), URE (urease), H2S

Do identyfikacji izolatu bakteryjnego do gatunku należy wykonad conajmniej 20 testów identyfikacyjnych. Czasami
wykonuje się nawet 50 ponieważ zaledwie 90% szczepów wykazuje wszystkie typowe cechy gatunku. Przygotowanie tak
dużej ilości podłoży i sam proces identyfikacji (w metodzie klasycznej) jest bardzo czasochłonny. Dlatego pojawiły się
szybkie testy identyfikacyjne, zajmujące bardzo małą powierzchnię i łatwe w wykonaniu. Jedną z największych firm
produkujących takie testy jest API.

1) Testy API

Oparte na identycznych podłożach i odczynnikach co tradycyjne testy ale wszystkie składniki podłoża są w
formie zliofilizowanej i umieszczone są w niewielkich mini kuwetach. Kuwety te ukształtowane są w
plastikowej kasetce. Całośd umieszczona jest w specjalnej rynnie.
Wyróżniamy rozmaite testy API np.:
API 20 E - I

DENTYFIKACJA BAKTERII Z RODZINY

E

NTEROBACTERIACEAE W OPARCIU O

20

CECH

BIOCHEMICZNYCH

API 20 NE

– -//- non Enterobacteriaceae

API 50 CHB

–

I

DENTYFIKACJA BAKTERII Z

RODZAJU

BACILLUS

W OPARCIU O

50

CECH BIOCHEMICZNYCH

API RAPID

– odczyt wyniku następuje już po 4 godzinach

API 20 STREP - -//- Streptococcus
API 20 STAPH - -//- Staphylococcus


Procedura identyfikacji za pomocą testów API:
a) otrzymujemy 24 godzinną hodowlę na podłożu stałym !!!
b) 1 kolonię (monokultura) zawieszamy w 5 ml 0,85% NaCl
c) umieszczamy zawiesinę w dołkach wg instrukcji producenta (bez pęcherzyków powietrza, niekiedy

nawarstwiamy parafinę)

d) Do rynienki wlewamy wodę, a następnie umieszczamy tam kasetkę z próbkami
e) inkubujemy 24-48 h w optymalnej dla danego organizmu temperaturze
f) po inkubacji dodajemy odczynniki (wg instrukcji) i inkubujemy (opcjonalnie)
g) odczytujemy wynik korzystając z instrukcji i wprowadzamy do programu komputerowego