ĆWICZENIE II
OZNACZANIE HEMOGLOBINY TLENKOWĘGLOWEJ PRACOWNIKA ZATRUTEGO TLENKIEM WĘGLA
ZASADA METODY:
Metoda ta (wg Wolfa) polega na wykorzystaniu różnicy odporności hemoglobiny tlenkowęglowej, w porównaniu z Hb i HbO2 , na działanie kliku czynników fizykochemicznych. W podanej metodzie wykorzystuje się różnice skracalności HbCO i pozostałych barwnych składników krwi w temp 55°C i przy pH=5,0. W tych warunkach w ciągu dokładnie 5 min ogrzewania na łaźni wodnej wytrąca się niemal całkowicie hemoglobina i oksyhemoglobina z roztworu krwi, zadanego buforem octanowym, natomiast w roztworze pozostaje HbCO. Po odsączeniu wytrąconych osadów można oznaczyć kolorymetrycznie zawartość HbCO.
ODCZYNNIKI: bufor octanowy o pH=5
MATERIAŁ DO BADAŃ: krew
APARATURA:
Specol
Ultratermostat
SZKŁO:
Próbówka bez podziałki (na 10 ml)
Probówka z podziałką i korkiem szlifowym (na 15 ml)
Lejek o średnicy 3-4 cm, sączki bibułowe twarde
Pipeta szklana i automatyczna
WYKONANIE:
Z przygotowanej próby pobierz pipetą automatyczna do probówki bez podziałki 1 ml krwi, następnie pipetą szklaną odmierz 4 ml wody destylowanej i wlej do probówki z krwią. Z tak przygotowanego roztworu pobierz 2 ml płynu do probówki z podziałką i dodaje do niej 9 ml buforu o pH=5. Zatkaj probówkę korkiem szlifowym i ostrożnie wymieszaj (nie wstrząsaj !!). Probówkę umieść na 5 minut w termostacie o temperaturze 55°C. Po ogrzaniu probówkę ostudź pod zimną wodą. Odstaw probówkę na kilkanaście minut a następnie przesącz roztwór przez twardy sączek na lejku, najlepiej od razu do kuwety fotometru.
Ekstynkcje roztworu należy odczytać przy długości fali 570 nm wobec kuwety z buforem octanowym o pH=5.
Wynik w % HbCO we krwi oblicza się ze wzoru:
% HbCO = 36,6 *E570 - 0,28
ZAKRES OBOWIAZUJĄCEGO MATERIAŁU:
Właściwości fizykochemiczne tlenku węgla, występujące w przemyśle zagrożenia tlenkiem węgla
Zasada oznaczenia wg Wolfa
Działanie toksyczne tlenku węgla na organizm człowieka